Text

Desain Vektor Gen Penyandi Protein Pendarfluor pRHA::PelB-mCherry 571.2 LAN d

---

ABSTRAK

Protein pendarfluor mCherry merupakan salah satu protein reporter yang berperan
memudahkan mendeteksi keberadaan suatu protein.Konstruksi vektor rekombinan menggunakan
vektor pRHA dimaksudkan untuk memperoleh suatu konstruksi vektor rekombinan mCherry
yang dapat diekspresikan pada periplasma E.coli karena adanya peptida sinyal pelB serta
menggunakan penanda Ampicillin.Perbanyakan sumber vektor pRHA dilakukan dengan prosedur
kloning pada E.coli TOP’10. Proses restriksi sumber vektor pRHA dilakukan menggunakan
enzim NcoI dan XhoI menghasilkan vektor pRHA untuk insersi gen mCherry. Ligasi vektor
pRHA dan mCherry menggunakan enzim T4 Ligase pada suhu 22 0C dan ditransformasi pada
E.coli DH5α dengan metode heat-shock.E.coli ditumbuhkan pada medium LB agar dengan
konsentrasi Ampicillin sebesar 100 mg/mL.Seleksi dilakukan pada LB cair dan LB agar dengan
rentang konsentrasi Ampicillin dari 100 mg/mL dan 200 mg/mL. Pada proses seleksi terakhir
diperoleh dua isolat yang berhasil tumbuh pada konsentrasi Ampicillin sebesar 200 mg/mL yaitu
isolat 7 dan 11. Kedua isolat ditumbuhkan pada medium LB cair dan dilakukan isolasi
plasmid.Berdasarkan hasil visualisasi elektroforesis dari isolasi plasmid isolat 7 dan 11
menunjukkan tidak adanya pita vektor. Hal ini dapat terjadi karena konsentrasi plasmid hasil
isolasi terlalu rendah dan adanya integrasi gen resisten Ampicillin dari vektor ke genom E.coli
DH5α.
Kata kunci: Ampicillin , E.coli, mCherry dan pRHA

ABSTRACT

MCherry fluorescent protein is a reporter protein with a role to facilitate other protein
detection. Recombinant vector construction using pRHA vector was meant to design a
recombinant vector that can be expressed in periplasm of E.coli which is directed by pelB signal
peptide and Ampicillin as marker. pRHA vector was multiplied by cloning procedure in E.coli
TOP’10. Restriction process of pRHA vector carried by NcoI and XhoI enzyme to create pRHA
vector that ready to use to insert mCherry fluorescent gene. T4 Ligase enzyme was used to insert
mCherry fluorescent gene into pRHA vector at 22 0C and transformed into E.coli DH5α by heatshock method. E.coli inoculated in LB agar with 100 mg/mL Ampicillin. Screening was done in
LB Broth and LB Agar with the variation of Ampicillin concentration, 100 mg/mL and 200
mg/mL. Isolate 7 and 11 were obtained during the last screening in medium contained 200
mg/mL Ampicillin. Both were cultured in LB Broth medium for plasmid isolation procedure.
Plasmid electrophoresis results of isolate 7 and 11 both showed no band. There is a possibility of
the low concentration of plasmid obtained during isolation and the integration of Ampicillin
resistant gene from vector to the genome of E.coli DH5α.
Key words :Ampicillin, E.coli, mCherry, dan pRHA

---

Ketersediaan

1051B17I

1051 B 17

Perpustakaan FSM Undip (Referensi)

Tersedia

Informasi Detail

Judul Seri

BIOLOGI

No. Panggil

1051 B 17

Penerbit

: ., 2016

Deskripsi Fisik

-

Bahasa

Indonesia

ISBN/ISSN

-

Klasifikasi

1445

Tipe Isi

-

Tipe Media

-

Tipe Pembawa

-

Edisi

-

Subjek

-

Info Detail Spesifik

-

Pernyataan Tanggungjawab

Siu Semar Saratu’ Langden

Versi lain/terkait

Lampiran Berkas

Komentar

---

Anda harus masuk sebelum memberikan komentar