Text

Ekspresi dan Purifikasi Enzim DNA Polimerase Pfu pada Escherichia coli BL21 Star (DE3)

---

Enzim DNA polimerase adalah polimerase umumnya digunakan sebagai enzim
untuk amplifikasi untai DNA dalam PCR. Taq polimerase umumnya digunakan
sebagai enzim untuk amplifikasi untai DNA dalam PCR, namun enzim ini memiliki
kelemahan yaitu tidak memiliki kemampuan proofreading (3'-5' exonuclease) dan
tingkat keakuratan yang rendah (8x10-6 mutasi/bp/duplikasi). Untuk mengatasi
kekurangan Taq polimerase digunakan enzim DNA polimerase lain yaitu enzim
DNA polimerase Pfu. Adapun kelebihan enzim DNA polimerase Pfu adalah stabil
pada suhu 90°C dan memilikintingkat keakuratannyang tinggi. Tujuan penelitian
ini adalah mengekspresi dan mempurifikasi protein DNA polimerase Pfu
rekombinan. Ekspresi protein DNA polimerase Pfu dilakukan dengan menginduksi
menggunakan IPTG. Protein DNA polimerase Pfu selanjutnya di purifikasi melalui
dua tahapan menggunakan Teknik kromatogafi afinitas dengan menggunakan
kolom HisTrap™ dan kromatogafi tukar ion menggunakan kolom HiTrap™. Proses
purifikasi kemudian didialisis lalu Konsentrasi protein total diukur dengan
spektrofotometer pada panjang gelombang 562 nm menggunakan metode
Bicinchoninic Acid (BCA). Hasil pengukuran menunjukkan konsentrasi protein
total tertinggi adalah sampel crude. Konsentrasi final pada sampel crude adalah
2232.646μg/mL, konsentrasi final pada purifikasi IMAC sebesar 558.092 μg/mL
dan IEC 148.694 μg/mL. Hasil analisis SDS PAGE menunjukkan protein DNA
polimerase Pfu rekombinan berukuran 90.113 kDa.

Kata Kunci: Ekspresi protein, E. coli BL21 star (DE3), Pfu, IMAC, IEC,

---

Ketersediaan

102B.TEK2023

102 B.TEK 2023

Perpustakaan FSM Undip

Tersedia

Informasi Detail

Judul Seri

-

No. Panggil

102 B.TEK 2023

Penerbit

: .,

Deskripsi Fisik

-

Bahasa

Indonesia

ISBN/ISSN

-

Klasifikasi

NONE

Tipe Isi

-

Tipe Media

-

Tipe Pembawa

-

Edisi

-

Subjek

-

Info Detail Spesifik

-

Pernyataan Tanggungjawab

Faiz Raihan Akbar

Versi lain/terkait

Lampiran Berkas

Komentar

---

Anda harus masuk sebelum memberikan komentar